一種新的用于快速病毒定量的轉基因Sf9細胞系
發(fā)布時間:2024-11-18 瀏覽次數(shù):449
在醫(yī)藥行業(yè)中,昆蟲細胞系經(jīng)常用于生產重組蛋白,其生產過程需要對重組昆蟲病毒進行遺傳工程操作。重組病毒可以根據(jù)病毒量化過程用于實驗中。然而,目前的病毒定量方法受技術和經(jīng)驗要求,持續(xù)時間長且復雜。Kyu-Seek Kim等人為解決這一問題,設計了一種可用于快速和便捷地量化昆蟲病毒的新型轉基因Sf9細胞系。
Sf9-QE細胞系
Sf9-QE細胞系通過引入熒光基因,能夠在病毒感染后迅速發(fā)出高熒光,從而簡化了病毒量化過程。與傳統(tǒng)的昆蟲細胞系相比,使用Sf9-QE細胞系可以將病毒量化的時間縮短4至6天。該細胞系的平均直徑約為16微米,比普通Sf9細胞小2微米,但其增殖速率卻是普通Sf9細胞的1.6倍。研究還發(fā)現(xiàn),Sf9-QE細胞系在至少100次傳代后仍能保持其特性,表明其穩(wěn)定性相對較高。此外,熒光光度法也方便了病毒感染的定量。
Kyu-Seek Kim等人在文章中還詳細描述了Sf9-QE細胞系的構建過程,包括使用piggyBac系統(tǒng)將目標基因片段轉化到Sf9細胞基因組中,以及通過抗生素篩選和多次傳代來選擇表達EGFP(增強型綠色熒光蛋白)的轉基因細胞系。此外,研究還評估了Sf9-QE細胞系在病毒感染后的熒光強度,并與其他細胞系進行了比較。
圖1 不同Sf9細胞株對病毒感染的熒光表達水平比較
如圖1所示,比較了20株Sf9-T細胞株對病毒感染的熒光表達水平。結果顯示,在所有Sf9-T細胞系中,包括作為對照的Sf9-ET,在每過3天就能觀察到清晰的熒光表達。值得注意的是,Sf9-T-20細胞在每過1天就能觀察到熒光表達,并在4天達到最大值,此時熒光強度大約是Sf9-ET細胞的5倍。因此,選擇熒光最快速、最強烈的Sf9-T-20細胞系作為最終的轉基因細胞系,命名為Sf9-QE(“QE”代表quick and easy)。
關鍵發(fā)現(xiàn):
— 使用piggyBac系統(tǒng)將目標基因片段轉化到Sf9細胞基因組;
— 通過抗生素篩選和多次傳代來選擇表達EGFP(增強型綠色熒光蛋白)的轉基因細胞系;
— 通過引入熒光基因,能夠在病毒感染后迅速發(fā)出高熒光,從而簡化病毒定量過程。
結論:總的來說,Sf9-QE細胞系的開發(fā)為醫(yī)學和制藥行業(yè)中重組蛋白的生產和研究提供了一個有用的工具,有望顯著提高病毒量化的效率和準確性,從而對人類健康和醫(yī)療保健做出貢獻。
引用文獻:Kyu-Seek Kim, Jun-Su Bae, Hyuk-Jin Moon, Do-Young Kim, Soo-Dong Woo. A Novel Transgenic Sf9 Cell Line for Quick and Easy Virus Quantification[J].Insects,2024,Vol.15(9): 686
來源:微生物安全與健康網(wǎng),作者~梁冬雪。